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        1. NRPA37 重组BirA生物素连接酶(CBD标签)(rC-BirA)

          发布日期:2021-05-09 阅读次数:2034

          品    名:重组BirA生物素连接酶(CBD标签)(Recombinant BirA Biotin Ligase, CBD-tag; rC-BirA)

          目 录 号:NRPA37S

          规    格:100μg1 mg10 mg

          产品形式:冻干粉冻干前溶液为10mM Tris-HCl, pH8.0溶液

          分 子 量:44.5kDa

          等 电 点:7.14

          活    性:≥4000 U/mg

          纯    度:≥95%(SDS-PAGE检测)

          浓度测定:280nm吸收法摩尔吸光系数为6.85×104(mol/L)-1·cm-1即c(g/L) = A280nm/1.54

          内 毒 素:≤5EU/mg

          来    源:大肠杆菌

          保存条件:-20℃保存

          有 效 期:3.


          相关介绍:

            BirA生物素连接酶由大肠杆菌中的BirA基因编译表达可用于特定蛋白质的生物素化反应通过该酶的催化反应可将生物素共价连接到特定的蛋白质上.特定的蛋白质指含有AviTag的标签蛋白可通过基因工程方式获得AviTag1般由15个氨基酸残基组成的"昵(GLNDIFEAQKIEWHE)可以与目标蛋白的N端或C端融合融合了AviTag的蛋白于BirA催化作用下可将生物素共价连接到该标签中的赖氨酸上实现定向生物素化.

            重组BirA生物素连接酶(CBD标签)由BirA基因与CBDtag .HisTag融合表达并高度纯化具有高活性 .高效率 .高纯度 .高稳定性的特点可用于含AviTag重组蛋白的体外生物素化.

           `从μ逑:50mM Bicine缓冲液pH8.310mM ATP10mM MgSO450μM生物素40μM AviTag重组蛋白10μg/ml rC-BirA可参考下表加入各组分30℃反应30min.也可以于其他温度反应如室温25℃反应1-4h或4℃反应过夜不同的蛋白可能存于反应速率不1样的情况可适当调节酶量以获得更好的反应效果.除Bicine缓冲液外其它缓冲液也可用于反应如20mM Tris-HCl等有些试剂会降低该酶的催化活性如NaCl .甘油 .硫酸铵 .β-巯基乙醇等应尽量降低样品中这些试剂的含量.反应结束后的样品可以通过透析 .超滤 .凝胶过滤等方式去除试剂如需纯化可用我司的ee-Streptavidin NUPharose FF可逆亲和层析进行纯化特异性纯化生物素化蛋白.

          表1 rC-BirA催化AviTag重组蛋白生物素化参考反应体系

          组分

          体积

          Buffer A: 500mM Bicine缓冲液pH3.3

          0.1ml

          Buffer B: 100mM ATP100mM MgSO4500μM生物素

          0.1ml

          80μM AviTag重组蛋白

          0.5ml

          100μg/ml rC-BirA溶液

          0.1ml

          蒸馏水

          0.2ml

          总体积

          1.0ml

          活性定义:于上述反应条件下30℃ .30min催化1nmol AviTag重组蛋白生物素化所需的酶量为1U.

          图片1.jpg

          M:蛋白质分子量标准

          Lane 1:rC-BirA

          注意:本产品仅限于科研使用.


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